熒光探針pcr試劑盒的相關(guān)知識點介紹

　　熒光探針pcr試劑盒的原理在于PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時,探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
 

　　常用于熒光免疫法中標記抗原或抗體，亦可用于微環(huán)境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時，與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。
 

　　目前，熒光探針pcr試劑盒的方法主要有單點測定和電荷耦合裝置(CCD)熒光成像(包括用于微區(qū)分析的激光共聚焦熒光顯微鏡成像)。由于光電倍增管點掃描時間較長，激光照射強度高，很難抓住熒光早期變化。而CCD熒光成像的面陣大，成像視野廣，成像時間可以調(diào)節(jié)，因而檢測效果比較好。
 

　　化學(xué)發(fā)光檢測的特點是設(shè)備簡單、操作簡便、分析速度快及靈敏度高。化學(xué)發(fā)光成像分析(CLI)是將化學(xué)發(fā)光與成像技術(shù)相結(jié)合，從而具有分辨率高、多樣品同時檢測、光譜響應(yīng)范圍寬以及靈敏度高等特點。已廣泛應(yīng)用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學(xué)發(fā)光信號檢測。