豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作要領(lǐng)

　　豬腦鈉素(BNP)是一種由心臟分泌的利鈉肽，在心血管疾病的診斷和治療中具有重要意義，豬腦鈉素ELISA試劑盒采用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過校準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)濃度。
 

　　豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作步驟：
 

　　1.加樣：標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，加入50μl不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品；空白孔設(shè)定1個(gè)孔，加入50μl蒸餾水作為空白對(duì)照孔；待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl，使樣品稀釋度為5倍。
 

　　2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 

　　3.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
 

　　4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
 

　　5.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
 

　　6.溫育：操作同2。
 

　　7.洗滌：操作同4。
 

　　8.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
 

　　9.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
 

　　10.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)，測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。